文摘
客观的定义的临床病理的特点amphiphysin-immunoglobulin G(免疫球蛋白)介导的神经病变。
方法病人检查在我们的机构从1995年1月1日,9月30日,2018年,与amphiphysin-IgG通过间接免疫荧光和免疫印迹,综述。相比他们的表型的共存collapsin response-mediator protein-5 (CRMP5)免疫球蛋白或anti-neuronal核1型(ANNA1-IgG)和CRMP5-IgG自身免疫抗体。改善改良Rankin规模(夫人)(≥1)后续被认为是一个有利的结果。Amphiphysin RNA表达在健康评估神经。
结果53 amphiphysin-IgG-positive病例。神经病变患者33例(60%),21个amphiphysin-IgG孤独,和12个共存自身抗体(ANNA1-IgG n = 8;CRMP5-IgG, n = 2;ANNA1-IgG CRMP5-IgG, n = 2)。在孤立amphiphysin-IgG自身免疫系统疾病包括多神经根神经病(62%)、弥漫性感官neuronopathy(35%),与胃轻瘫和面部神经病变(3%)。其中,疼痛(80%)、乳腺癌(63%),对中枢神经系统(57%)责任人通常共存,和神经病变常常引起乳腺癌的诊断(76%)。Stiff-person谱系障碍是最常见的中枢神经系统伴奏(45%)。神经活检显示轴突丧失(n = 6/6), subperineurial水肿(n = 4/6)和CD4主要炎症(n = 2/6)。夫人的分数最后随访中值为3.5;58%的患者immunotherapy-responsive。患者amphiphysin-IgG仅比患者更有利的免疫治疗反应CRMP5-IgG多神经病(n = 45) (44% vs 16%,p= 0.028,优势比为4.2,95%置信区间1.1 - 15.5)。只有1/9的患者(11%)与共存amphiphysin-IgG CRMP5-IgG或ANNA1-IgG免疫治疗的反应。RNA amphiphysin表达发生在低水平的神经。
结论Amphiphysin-IgG自身免疫性神经病变可辨认的表现型,经常的免疫反应,可以提示乳腺癌的早期诊断。
术语表
- ANNA1=
- antineuronal核抗体1型;
- CRMP5=
- collapsin response-mediator protein-5;
- 免疫球蛋白=
- 免疫球蛋白G;
- 国际金融协会=
- 间接免疫荧光法;
- 夫人=
- 改良Rankin规模;
- 美国公共电视台=
- 磷酸盐;
- RT=
- 室温
Amphiphysin是细胞内蛋白质调节clathrin-coated突触囊泡。在细胞表面表达了短暂的检索终端等离子体膜后神经递质depolarization-induced胞外分泌。1Amphiphysin-immunoglobulin G(免疫球蛋白)自身免疫被首次发现与乳腺癌stiff-person综合症。2随后脑干、小脑和神经病变演示介绍了肺癌。3,- - - - - -,5的病理生理学amphiphysin-IgG最近中央兴奋过度了。6的amphiphysin SH3-domain-IgG人口内化,破坏gaba ergic突触。被动amphiphysin-IgG转移概括人类运动中枢兴奋过度的表型和焦虑。有较慢的内吞作用和快速的突触抑制gaba ergic疲惫。1
详细的理解缺乏amphiphysin-IgG-associated外围神经系统的参与。6尽管报道,神经病变是最常见的神经系统演示。3,- - - - - -,5在啮齿动物神经损伤模型中,amphiphysin表达式是调节与突触囊泡内吞作用神经终端。7amphiphysin-IgG免疫介导的疾病的临床和病理特征可以提前了解和帮助临床医生。
方法
本研究在制度上批准。在梅奥诊所招募患者检查。都有amphiphysin-IgG血清阳性(免疫荧光和免疫印迹积极)确定在我们的神经免疫学实验室(1995年1月1日至9月30日,2018年)。标准技术:替代神经病变原因被排除在外的糖尿病,B12叶酸缺乏,B6毒性,myeloperoxidase-associated血管炎、paraproteinemia和酗酒。综合多种自身抗体进行评估。8Amphiphysin-IgG表型与共存相比自身抗体和CRMP5-IgG-isolated神经病变。9
间接免疫荧光法(IIF)测定
病人血清和CSF和商业抗体测试cryosectioned(4µm)复合成年小鼠组织:小脑,中脑,大脑皮层、海马、肾脏和肠道。3,9部分是用4%多聚甲醛固定1分钟,然后permeabilized 3 - [(3-cholamidopropyl) dimethylammonio] 1-propanesulfonate(家伙),0.5%,在磷酸盐(PBS, 1分钟),然后阻塞1小时正常山羊血清在PBS (10%)。PBS冲洗后,病人标本应用(血清与牛肝粉、preabsorbed 1:240稀释,CSF nonabsorbed, 1:2稀释)。40分钟后,和PBS洗,特有的二次抗体共轭与异硫氰酸荧光素(1:10 0)或tetramethylrhodamine(1:10 0)是应用(生物技术协会南部、伯明翰、AL)。盖玻片是安装使用延长黄金不变色介质(包含DAPI;分子探针,热费希尔科学,沃尔瑟姆,MA)。荧光图像捕获使用奥林巴斯(日本东京)BX51偏光显微镜与奥林巴斯DP73高性能Peltier-cooled, 17.28像素的摄像头。病人标本产生积极amphiphysin结果滴定翻倍稀释,以确定自身抗体检测的端点。样品与amphiphysin特征模式的稀释≥1:240反折的西方墨点法进行进一步确认测试。
免疫印迹分析
IIF暗示amphiphysin结果证实了使用重组免疫印迹分析完整的人类amphiphysin蛋白质(UNIPROT ID: P49418)。蛋白质是由钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳分离和转移到硝基。病人标本稀释1:30到阻断缓冲区(10%牛奶,20毫米Tris-HCL pH值7.6,和140毫米氯化钠)。稀释标本孵化15分钟,然后洗膜的清洗缓冲(20毫米Tris-HCL pH值7.6和140毫米氯化钠)。二次反免疫球蛋白耦合,辣根过氧化物酶稀释成阻断缓冲区和孵化膜在室温下30分钟(RT)。膜清洗,清洗缓冲60分钟rt,使用电化学发光信号了电影。蛋白质带对应于amphiphysin比较积极控制乐队。结果定性报道看作是积极的还是消极的。
分析性能特征
总共有120名健康捐献者amphiphysin IIF化验和测试样本报告< 1:240(负)。的amphiphysin免疫印迹试验测试102健康的捐赠者和血清都是负面的。此外,17单克隆丙种球蛋白病病人的待定意义,17个系统性红斑狼疮患者,患者和16 hypergammaglobulinemia(没有已知的潜在恶性肿瘤)进行了测试,都是负面的。
临床结果和统计分析
改良Rankin量表(夫人)评分和5年死亡率被确定。变化(≥1)后续夫人被认为是一个有利的结果。统计分析使用Kruskal-Wallis-H测试与事后分析评价抗体子组之间的名义和连续变量。
RNA表达
解剖坐骨神经(n = 4)从人没有神经病变均获得TaqMan基因表达分析两栖的基因(Hs01047924_m1,热Fisher);18 s核糖体RNA (Hs03003631_g1,热Fisher)被用作参考的控制。PCR反应进行了使用应用生物系统公司(CA)福斯特城ViiA-7。表达测量从40 ng总RNA的一式四份。标准循环协议实时PCR进行。
数据可用性
当前研究和分析使用的数据集是可从相应的作者以合理的要求。
结果
53 amphiphysin-IgG-positive病人评估在梅奥诊所,33例(60%)有神经病变。这些33例,21只amphiphysin-IgG, 12共存自身抗体(antineuronal核抗体1型(ANNA1-IgG), n = 8;collapsin response-mediator protein-5 CRMP5-IgG, n = 2;ANNA1-IgG CRMP5-IgG, n = 2)。人口和临床细节21 amphiphysin-IgG-positive, 12 amphiphysin-IgG共存与其他自身抗体和CRMP5-IgG单独的进行了总结表。
Amphiphysin-IgG-seropositive情况下没有其他自身抗体(n = 21)
平均发病年龄为65岁(45 - 79);19(91%)是女性;18(18/20,90%)相关的恶性肿瘤。随访时间中位数为38个月(范围4 - 149个月)。乳腺癌(n = 12, 63%)是最常见的癌症相关其次是小细胞肺癌(n = 4, 22%),大细胞肺癌(n = 1, 5.5%)和肺腺癌(n = 1, 5.5%)。前16名患者(76%)有神经病变诊断癌症检测。癌症诊断早期症状早在4个月(范围2-24个月)。标准癌症检测方法是充足的除了一个乳腺癌的案例中,PET成像是必需的。
大多数患者慢性(9/17,症状出现最低点> 8周)或亚急性(6/17,症状出现最低点4 - 8周)出现对称的神经病变(n = 11, 52%)。神经病变表型演示包括多神经根神经病(n = 13, 62%),感觉neuronopathy (n = 7, 35%),面部神经麻痹,肠胃蠕动障碍1例(4%)。疼痛是常见的,在16个记录疼痛,9(56%)对毒品的痛苦。自主神经功能失调仅限于2 amphiphysin-IgG-positive胃轻瘫下没有cardiovagal或直立性神经异常。共存的中枢神经系统的参与是常见的(12[57%]),包括一个或多个以下:stiff-person综合症(n = 9),脊髓病(n = 6),和小脑性共济失调(n = 4)。
神经传导研究和针进行了肌电图在21例19。肢体运动和感觉神经传导振幅降低在14日与肌电图研究表明针自发的插入活动和运动神经源性的变化,所有polyradicular方式包括paraspinal颤动。未见脱髓鞘的特性。4名患者与正常神经条件突出了远端感觉丧失和神经源性运动单位电位与颤动符合多神经根神经病与核磁共振成像为脊髓病阴性。患者CSF分析(n = 13), 53%蛋白升高(> 50 mg / dL)或淋巴细胞脑脊液细胞增多。
神经活检仅在amphiphysin-IgG (n = 6)情况下,轴突纤维损失明显下降(扩散n = 5或多病灶的n = 1)与subperineurial水肿4和大神经外周血管炎症2 (CD4的)(图1)。
单独例神经组织病理学amphiphysin-immunoglobulin G自身免疫性神经病变和amphiphysin表达健康的神经。(一)Epoxy-embedded semithin小节展示intraneural轴突纤维损失与subperineurial水肿。(B)苏木精和伊红石蜡的同一案件中显示大量单核细胞神经外微血管周围没有血管壁破坏。金宝搏188手机app(C) TaqMan基因表达水平相比amphiphysin 18 s核糖体RNA在4坐骨神经(样品1 - 4)显示的表达水平amphiphysin家政核糖体RNA基因相比,大约10×不到这个基本的看家基因。
中位数夫人最后随访3.5(范围2 - 6)。15 amphiphysin-IgG-positive患者接受免疫疗法对神经病变包括一个或多个管理四甲基强的松龙(IVMP)(连续5天每天1克,n = 8),静脉注射免疫球蛋白(n = 8)、血浆置换(n = 4),口服强的松(n = 7)、环磷酰胺(n = 5),美罗华(n = 1),以及霉酚酸酯(n = 1)。有一个显著的免疫治疗和改善协会(≥1)夫人(58% vs 0,p= 0.042)。夫人的变化接受免疫治疗的患者与其他患者接受癌症治疗或治疗症状明显高于(变化中值1[范围−3 - 2]夫人vs 1.5−−3 - 0,p= 0.042)。尤其是,与一线使用环磷酰胺免疫疗法(IVMP (n = 3)或静脉注射免疫球蛋白(n = 2])与有利的结果(80% vs 27%,p= 0.049)。与治疗没有明显联系的潜在恶性肿瘤和神经结果衡量六夫人(29%)死亡记录在5年内发病。
Amphiphysin-IgG例并存多种自身抗体(n = 12)
十二amphiphysin-IgG患者有其他自身抗体前所述与免疫介导性疾病(ANNA1-IgG n = 8;CRMP5-IgG, n = 2;ANNA1-IgG CRMP5-IgG, n = 2)。在这些情况下,小细胞癌是最常见的恶性肿瘤(9/12,75%),和一个病人得了乳腺癌。两个病人癌症检查有限没有后续。感觉neuronopathy(不对称的感觉丧失重要的感觉性共济失调)是最常见的表型表现(9/12),其次是多神经根神经病(2/12,这两种情况下与CRMP5-IgG amphiphysin-IgG),和一个length-dependent感觉运动神经病变。11个患者肌电图和神经地方剧种。九个有感觉的神经病变,以最小的(n = 4)或没有(n = 5)复合肌肉动作电位异常和正常的EMG针。两个患者CRMP5-IgG和amphiphysin-IgG轴突感觉运动神经病变以及近端针EMG发现符合多神经根神经病。8个艾滋病病人需要步态,7轮椅绑定。9患者6显示持续的疾病进展(图2一个)。
(一个)显示amphiphysin-IgG-positive患者没有共存的多种抗体或与乳腺癌有多神经根神经病最常见的表型。正确显示这些amphiphysin-IgG-positive神经病变患者有共存antineuronal核抗体1型(ANNA1)免疫球蛋白或CRMP5-IgG或小细胞肺癌与感官neuronopathy呈现更常见。(B)的比较孤立CRMP5-IgG自身免疫性神经病变仅amphiphysin-IgG自身免疫性神经病变显示频率的乳腺癌,自主功能障碍,stiff-person谱系障碍,炎症模型的相对缺乏,比CRMP5-IgG自身免疫性神经病变和临床改善。
比较amphiphysin-IgG CRMP5-IgG
Amphiphysin神经病变是CRMP5-IgG神经病变相比,在女性中更为常见,明显高于Amphiphysin协会乳腺癌(63% vs 0,p< 0.001)。相比之下,小细胞肺癌中更频繁地发现CRMP5-IgG自身免疫的病人。多神经根神经病是一种常见的表现型这两种特异性自身抗体。自主神经功能障碍明显更常见于CRMP5-IgG自身免疫。炎症脑脊液(CSF蛋白质或淋巴细胞升高白血球增多)是更常见的CRMP5-IgG (92% vs 54%,p= 0.008)。的患者比例明显高于amphiphysin-IgG神经病变有良好的结果(44% vs 16%,p= 0.028,优势比为4.2,95%置信区间1.1 - 15.5)(图2 b)。随访期间患者之间amphiphysin(平均38个月(范围4 - 149个月))和CRMP5(平均14(范围4 - 840个月))神经病变是相似的。
Amphiphysin神经表达
Amphiphysin表达式中检测出周围神经,但明显低于18 s核糖体RNA在人类坐骨神经(4图1)。
讨论
本研究支持频繁amphiphysin-IgG自身免疫的发生神经病变(60%)。患者孤立amphiphysin-IgG通常是女性(91%)与痛苦的对称的轴突多神经根神经病发作或感官neuronopathy。相比之下,CRMP5-IgG共存和ANNA1-IgGs患者更常见的肺癌(71%)(表和图2)。自主功能仅限于肠胃蠕动障碍。Stiff-person谱系障碍很常见(45%),而且在大多数乳腺癌(76%),神经病变早诊断。中枢神经系统兴奋过度可能模糊神经病变定位;因此神经传导研究和针EMG在识别典型的神经病变是重要的polyradicular本地化。免疫治疗管理良好的临床结果有很大的影响类似于stiff-person综合症,在广泛的改善报告。10
本研究的局限性包括其免疫治疗方案利用回顾性设计和变量。同时,这种罕见的少量副肿瘤综合征使评估协会或相关的困难。
这项工作有助于了解周围神经参与amphiphysin-IgG自身免疫。之前工作支持的瞬时表达amphiphysin表面的突触间隙支持直接抗体介入病机amphiphysin副肿瘤综合征。6此外,被动转移amphiphysin免疫球蛋白已经证明老鼠类似人类疾病发展中央超兴奋性表型存在剂量依赖的相关性,实现了抗体causalty Witebsky假设。6类似的实验需要评估的角色amphiphysin免疫球蛋白的描述多种神经病变。然而,免疫治疗反应,immune-phenotyping CD4主要炎症和amphiphysin表达式在健康神经可能支持致病的潜在amphiphysin免疫球蛋白。另外,神经病变的患者中,这些抗体的存在可能作为潜在的替代指标t细胞自身免疫共享amphiphysin自身抗原。医生应该意识到amphiphysin-IgG-mediated神经病协助早期癌症诊断。
研究资金
本研究支持的个性化医学中心,梅奥诊所的基础。资助者没有参与这项研究的设计和实施;的收集、管理、分析、解释数据;准备、审查或批准的手稿;或者决定提交出版的手稿。
信息披露
d . Dubey已经收到了多发性硬化症研究中心的支持和自身免疫性神经学、转译研究创新和测试开发办公室,和Grifols药品;首页咨询了UCB制药(所有赔偿咨询活动是直接支付到梅奥诊所);有专利未决KLHL11神经自身免疫的标志;的编辑委员会临床医学杂志。j . Jitprapaikulsan h . Bi, r·巴斯克斯Campo报告没有披露相关的手稿。Grifols, a .麦肯报告赠款Alexion Euroimmun, Medimmune外提交的工作,有一个专利Septin-5-IgG悬而未决,PDE10A-IgG未决专利申请,专利MAP1B-IgG悬而未决。中华民国Pittock是一个名叫发明人申请专利,与功能性AQP4 / NMO-IgG化验和NMO-IgG作为癌症标记;有专利未决Septin 5 PDE10A和MAP1B标记神经自身免疫和多种疾病;咨询了Alexion和落实;收到Grifols研究支持,落实和Alexion。所有赔偿咨询活动是梅奥诊所的直接支付。Janean k Engelstad报告没有披露相关的手稿。j·米尔斯已收到研究转化研究的支持创新和测试发展办公室,专利使用质谱测量单克隆免疫球蛋白,并接收相关版税这些专利的结合位点。 C. Klein has received honorarium from Ackea for consultation on TTR amyloid and Fabry disease. Go to首页Neurology.org/N为充分披露。
附录的作者
脚注
去首页Neurology.org/N为充分披露。资金信息和披露认为作者相关的,如果有的话,年底提供这篇文章。
↵*这些作者的贡献同样这项工作。
- 收到了2019年4月15日。
- 接受的最终形式2019年6月4日。
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