文摘
目的:分析各种脑源性的诊断敏感性和特异性蛋白质(14-3-3,τ,神经元特异性烯醇酶[研究],和S100b)患者的CSF克雅氏病(CJD)和分析生物因素,修改这些参数。
方法:CSF测试为14-3-3,τ,分析了无,零星的患者和1859年S100b,遗传、医源性,在1117年和变异型克雅氏病,控制。
结果:最高灵敏度达到14-3-3和τ零星库贾氏症(85%和86%),和14-3-3联合测定的τ,S100b、了无敏感性增加到93%以上。多变量分析表明,所有测试的敏感性最高的最短的疾病持续时间,患者发病年龄> 40年,纯合性在129朊蛋白基因的密码子。在一群患者重复腰椎穿刺,第二个测试也增加了诊断的敏感性。
结论:检测脑源性蛋白水平升高的患者的CSF疑似克雅二氏症是一种有价值的诊断测试。第二个腰椎穿刺患者可能有价值的非典型临床课程的第一次测试是负面的。
14-3-3蛋白的检测脑脊液中重要的克雅氏病(CJD)的临床诊断。1 - 514-3-3蛋白升高95%的零星库贾氏症(sCJD),但灵敏度较低的其他形式的库贾氏症患者(如医源性、变异和遗传库贾氏症)。5 - 714-3-3的敏感性也不同在不同sCJD表型。8 - 14其他蛋白质也被测试:神经元特异性烯醇酶(研究),τ和磷酸化τ,病患和S100b蛋白,前列腺素,白细胞介素,Aβ1-42。11日,第15 - 22
结合几个标记可以用来提高临床诊断的敏感性和特异性。1、5、14、21、23日一个理性的方法库贾氏症的早期诊断和具体需要进一步考虑。执行一组生化测试的基本原理还没有评估。
我们专注于分析脑源性蛋白质在不同形式的CSF谢霆锋敏感性和特异性和调查选定的病人特点对这些参数的影响。
方法。
病人。
委员会的框架内研究跨国研究。病人被称为国家监测CSF 14-3-3蛋白的检测单位,在日常临床诊断和监测。
样本被送到各个实验室的检测CSF 14-3-3参与国家1998年和2003年之间。所有国家收集临床和neuropathologic数据从这些临床怀疑库贾氏症或相关疾病患者。相应的诊断被跟踪了。每个实验室提供的数据和样本如下:西班牙906(占总数的30%),866年德国(29%)、意大利523年(18%),443年英国(15%)、瑞士164年(5.5%)、波兰39(1.3%)、希腊20(0.7%)、斯洛伐克15 (0.5%)。
临床资料如发病年龄、性别、疾病持续时间,时间点的腰椎穿刺(LP),含有朊密码子129基因型,PrPSc同形像,和最终的临床和neuropathologic诊断收集中心。成立了一个数据库,其中包括详细的数据2976年CSF标记和病人的特征样本库贾氏症患者和控制患者。在所有参与中心,库贾氏症的诊断和各种库贾氏症亚型是根据建立,国际商定的标准。代谢途径所有参与者国家属于EUROCJD与可比监测方法监测网络。控制患者那些证明没有库贾氏症或其他朊病毒疾病,然而,明确替代诊断并不总是可能的。对照组患者的诊断(non-CJD患者)是基于神经病理学(只要有可能)和临床随访信息。为进一步分析,对照组患者后被分配到一个组:神经退行性、炎症、肿瘤相关,缺血性中风,精神病,代谢等。在分析,只控制一个明确的临床和神经系统的诊断患者包括结果数据从251年控制患者被排除在外。
CSF被LP在通知医院在病人的调查和测试进行了在每个实验室根据共同商定标准,后面将更详细地描述。结果输入到数据库中。
脑脊液检查。
在数据采集的初始阶段,我们进行了一次环之间的审判参与实验室,以确保结果的可比性之间的中心。我们采用两种方法。
十选脑脊液样本发送给所有参与实验室。这10个从库贾氏症患者脑脊液样本,中枢神经系统炎症性疾病,广告,和一个血迹斑斑的脑脊液样本。原14-3-3免疫印迹电影进行扫描和参与者被要求执行一个视觉分析西方的屁股(作为负面评判,弱阳性,阳性),结果比较。发现不同的中心同意的分类结果,此外,任何个人中心不同于整个集团的敏感性和特异性。在大多数情况下,anti-14-3-3β兔多克隆抗体(sc - 629,圣克鲁斯生物技术)作为主要检测抗体。小14-3-3检测协议的差异在个人实验室对测试结果没有影响。CSF存储时间的中位数LP - 14-3-3测试8天,疾病发作和LP之间的平均时间为4个月。
总共14-3-3测试进行2934个样本(包括106年从重复LP)。这组由1826个样本从各种形式的传染性海绵状脑病患者(TSE)从sCJD患者(1531个样本)和1108年从控制。
τ蛋白水平测定在1295年从1211年谢霆锋患者的样本被sCJD(819例)和220控制的病人。τ浓度测定的ELISA (Innotest hTau-Ag, Innogenetics,根特,比利时)。先前建立的截止值1300 pg / mL被用于进一步的计算。23
S100b蛋白水平测定966年谢霆锋病人样本被sCJD(589例)和162年控制。酶联免疫吸附测定S100b浓度测定。测试中执行三个中心(英国、西班牙和德国)使用各种检测方法。533年,样本含量决定使用商用测试套件(Byk Sangtec),而在其他的433个样本,使用先前描述的内部ELISA水平测定。29日自测试方法之间的敏感性和特异性改变,我们使用不同的截止点为每个测试(Byk Sangtec, 4.2 ng / mL,内部0.5 ng / mL)。
分析了无蛋白质含量测定748年谢霆锋病人样本从sCJD(517例)和113年控制。酶联免疫吸附分析了无浓度测定。各种商用测试套件。359个样本,霍夫曼LaRoche (Cobas-Core了无环评工具包)测试使用,312年样本分析了无决心使用Delfia了无(Wallac ADL GmbH,弗莱堡,德国),和77年样本情况下联络了无(DiaSorin公司Saluggia,意大利)。自测试敏感性和特异性不同方法应用中,我们使用不同的截止点为每个测试使用(霍夫曼LaRoche 35 ng / mL,瓦拉赫,25 ng / mL,和Byk Sangtec, 25 ng / mL)。1,30
统计分析。
描述性统计报告sCJD和控制患者;χ2测试和非参数Mann-Whitney测试是用来评估分类和连续变量之间的差异。对于每个CSF标记,敏感性和特异性都计算在我们的整体人口谢霆锋和控制患者;χ2是用来测试这些预测特征差异CSF标记。我们也计算阳性结果率为每个亚型谢霆锋。
多个逻辑回归模型被用来评估一组病人临床相关的影响特征的敏感性不同测试sCJD患者。我们在我们的模型中包括以下特征:疾病持续时间(几个月),发病年龄(年),疾病阶段LP执行时(在第一个三分之一的总持续时间的疾病,在第二次或第三),和含有朊密码子129基因型;样本的国家起源和病人进入也不做爱。
发病年龄在四个临床有意义的组年龄分类,40年是参照组的病人。疾病持续时间分类使用中位数作为分界点;我们将我们的病人在两组(短或长时间)。含有朊密码子129基因型输入模型中使用两个虚拟变量与MV组作为参考。的影响含有朊密码子129基因型和PrPSc同形像的敏感性测试,再次调整性和样本来源的国家,在另一个多元逻辑回归模型共同评估,尽管如此,由于少量的标记,分析了仅为14-3-3。再一次,使用多个逻辑回归性和原产国包括:不,我们也分析了特定(或个人)的临床因素是否影响的假阳性率控制。由于少量的其他标记,分析了仅为14-3-3。独联体生成调整口服补液盐和95%。
结果。
病人的特点。
数据库中包含详细的数据2976年CSF水平的几种蛋白质样品。大多数的样本属于各个谢霆锋形式(n = 1859)。明确neuropathologic诊断中可用sCJD的49%,47%遗传库贾氏症(gCJD), 47%的医源性库贾氏症,vCJD 61%, 76% FFI, GSS病人。共1117个样本来自另一个患者的诊断。大多数神经退行性疾病的诊断被分配到组(n = 604,样本总数的20%)。第二大组由炎性疾病患者的中枢神经系统(n = 213, 7%)。大部分谢霆锋样本来自患者sCJD (n = 1552,总数的52%和85%的东京证交所集团)。这组患者谢霆锋也尸检率最高(49.9%,从14.3到75.9%)。控制患者的尸检率较低(集团)总数的12.4%和子组之间的差异(在缺血神经退行性疾病的11.4%,26.9%,39.7%,多种或肿瘤相关组)。
患者组与sCJD从控制患者之间没有显著性差异对性(每组53%和49%的女性),发病年龄(67年,19例和66年到97年,在控制范围5 - 92)。
信息含有朊密码子129基因型在1319例(1069 sCJD和250控制病人)。大多数患者sCJD蛋氨酸可以纯(n = 656, 61.4%)或缬氨酸(n = 175, 16.4%),只有22.2% (n = 238)杂合的。在控制,47% (n = 118)纯合子的蛋氨酸,缬氨酸(n = 29)为12%,和41% (n = 103)杂合的。
的PrPSc同形像251年可用sCJD病例,其中175 PrPSc同形像统计图1和76 2型。
CSF的诊断标志物。
最初,我们计算的敏感性和特异性标记为所有证交所形式(表1)。我们都曾与定量水平标记测试除了14-3-3,的测试结果被评为积极或消极的。这后一种测试方法学问题之一是检测微弱的免疫反应性的乐队,被评为弱阳性。因此,我们计算了14-3-3的敏感性和特异性测试根据三种不同的策略来确定哪一个是最有利于制定临床诊断病例快速进行性痴呆:1)只考虑明确的结果(通过排除跟踪乐队)。这条规则后,我们计算一个整体测试谢霆锋疾病的敏感性为84.5% sCJD(88.8%)和特异性的83.6%,但我们失去了79例(4.2%)61(包括零星病例)在我们的计算。由于这种方法是不切实际的在临床环境中,我们分析了以下策略:2)考虑跟踪乐队积极成果或3)考虑跟踪乐队负面结果。第二种方法后,整个14-3-3-test敏感性为85.2% (89.3 sCJD)和特异性为79.2%。第三个策略显示较低的总体敏感性80.7% sCJD(85.1%),但增加的特异性(从79.2%到84.5%)增长5.3% (p< 0.01)。自我们的研究的主要目的是建立发展战略环境最好的临床库贾氏症诊断鉴别诊断的快速进步的痴呆,我们选择第三个战略为我们后续分析(表1)。
14-3-3的敏感性不同证交所亚型(表1)。sCJD,灵敏度为85%。医源性患者和gCJD 14-3-3水平升高75%和78%的病例。在变异型克雅氏病(vCJD),只有40%的水平上升14-3-3。GSS病人都是负面的,只有两FFI患者14-3-3积极。
τ水平,我们观察到类似的分布(表1)。灵敏度是sCJD患者群中最高,其次是遗传和医源性情况。使用1300 pg / mL的截止值,作为sCJD建议,vCJDτ的敏感性是24%。然而,通过使用不同的分界点500 pg / mL,正如前面提出的,5的敏感性vCJD增加到86%。
S100b水平升高82%的样本中观察sCJD患者。在其他证交所形成较高的积极成果与S100b观察与其他标记(表1)。然而,获得灵敏度S100b必须平衡低特异性观察这个标记(76%)。
sCJD的敏感性最低的CSF标记了无(73%),这也给了最高的特异性(95%)。医源性和gCJD,灵敏度较低(44%和60%)。分析了无灵敏度最低的是看到vCJD症(24%)。没有GSS, FFI患者积极的在这个测试。
一旦敏感性决定了每一个标记,我们分析的速度通过子组(表e 1假阳性结果首页网站www.首页neurology.org)。炎症、缺血和肿瘤疾病的大脑显示出较高的假阳性率。通常,这些条件可以通过常规CSF排除测试和脑成像。真正的问题库贾氏症鉴别诊断是其他神经退行性疾病,然而,当比较库贾氏症和这个小组,特异性高(90%,14-3-3为89%,τ)。
没有一个单独的标记可以区分不同形式的谢霆锋(数据未显示)。
在下一步中,我们试图确定每一个标记的值为每个sCJD亚型。结果给出了表2。我们发现所有患者PrP标记不太敏感Sc同形像统计图2比1同形像蛋白质。最低的敏感性在MV2亚型被发现。另一个是尝试分类sCJD成典型和非典型亚型患者根据之前提出的定义。9所有标记,经典的亚型灵敏度高(表2)。
病人特点影响测试的敏感性和特异性。
单变量分析表明,只有一个病人的特点研究了显著影响sCJD患者的所有测试的敏感性,即。、疾病持续时间、含有朊密码子129基因型,发病年龄(唯一的例外是疾病阶段的LP)。
在多变量分析中,当我们包括所有这些特征加上,所有仍然显著。LP时当我们分析疾病阶段,调整其他的变量,我们观察到一个趋势在14-3-3有更高的敏感性在以后的阶段:87.6%,88.0%,91.3%在第三(p值= 0.07),这种模式在所有标记都是一样的。我们发现比40年所有的测试有一个年轻的病人比老年患者显著降低灵敏度。患者的疾病持续时间超过6个月,所有的测试灵敏度有显著低于患者疾病持续时间短(因此更激进的课程)。最后,在病人的杂合的含有朊密码子129基因型明显所有的测试显示,纯合子的敏感性低于患者(表依照)。从不同的角度来看,产生了积极的预测概率14-3-3测试sCJD患者更高的测试执行时在一个单独的纯合子含有朊密码子129基因型,年龄超过40年,和疾病持续时间较短。也获得了类似的结果τ,S100b和了无(图)。
我们还研究了两者的影响含有朊密码子129基因型和PrPSc同形像统计图14-3-3的敏感性。包括变量相同的模型表明,他们分别对14-3-3的敏感性有显著的影响。14-3-3患者的PrP的敏感性较低Sc同形像统计图2比1型患者(OR = 0.16;95%置信区间:0.04 - 0.63;p值< 0.01)。还有在病人杂合的敏感性较低含有朊缬氨酸的密码子129比患者纯合子(OR = 0.15;95%置信区间:0.003 - 0.66;p值= 0.012),但未发现显著差异之间的杂合子和蛋氨酸该等位。
单变量分析表明,多个相关临床因素增加假阳性的14-3-3测试,即诊断类别(p值< 0.001),老年发病年龄(p值= 0.054),持续时间更短的疾病(p值< 0.01),短时间从发病到LP (p值< 0.05),大量的CSF细胞(p值< 0.001)。在多变量分析,以下仍作为假阳性率:相关炎症(p值< 0.01)或多种/ CNS-tumor疾病(p值< 0.001)相比,神经退行性疾病和CSF细胞数量的增加(p值< 0.05)。
所有患者一直在重复使用数据分析明确sCJD只有相似的结果。
标志组合。
为了分析两个标记的组合是否会提高临床诊断的敏感性和特异性快速进行性痴呆患者中,我们分析了所有可能的测试组合(表3)。最高的灵敏度是通过结合14-3-3水平升高的τ,S100b,或研究,无显著差异或τ和S100b的结合。关于不同sCJD亚型,两个CSF标记的组合显示最高的灵敏度PrP患者Sc同形像统计图1或经典的表型。与一个标记,结合两个测试增加了敏感性典型和非典型表型。每一个标记的测试灵敏度经典表型已经很高,但对于非典型表型,两个CSF标记的组合导致增加测试灵敏度。
关于所有non-TSE病人,实现最高的特异性与正常τ和了无水平(88%)。在进一步的分析中,我们看了看标志组合子群的神经退行性疾病(表3)。这里我们也发现特异性结合的负面τ或分析了无水平最高(91%),其次是负14-3-3或了无(82%)。对于神经退行性疾病,结合两个标记显示更高的特异性为整个non-TSE组除了包括S100b测试组合。
重复腰椎穿刺。
在84名患者,至少两个LP进行。两国14-3-3测试的平均时间为6周。在这些患者中,14-3-3是积极的LP在库贾氏症病例的65%,但是灵敏度高的第二个样本在后期疾病(79%)。特异性增加了第二个LP的结果考虑时(63%和69%)。表重复LP的e - 3显示了一个详细的分析各种脑源性蛋白质。根据这一点,我们观察到的总趋势进一步提高水平的脑源性蛋白质库贾氏症患者疾病进展。
讨论。
我们测试了一组脑源性蛋白质在患者CSF疑似病例库贾氏症来确定1)诊断实用程序结合或单独,2)结果在单一的CSF或反复脑脊液样本,和3)选择病人的影响特征试验敏感性和特异性。1 - 3、5 - 7、14日,24日,31日
脑源性蛋白质测试中,14-3-3最高灵敏度为所有类型的谢霆锋。在sCJD,灵敏度为85%。这是低于先前报道。2、3、7、21日31日低灵敏度测试可能与更高的患者数量在这项研究中,但也非常严格的策略定义14-3-3跟踪结果阴性。我们不能排除假阴性率高14-3-3测试也可以与一些非典型库贾氏症亚型越来越认可的系统监测的研究(比如MV2亚型)。所有测试的敏感性最高的零星的集团,降低医源性和遗传病例,和vCJD最低,FFI, GSS病人。
大多数病人分析14-3-3后一直被认为是国际商定的临床诊断标准的一部分。26日,27日虽然是一种常见的观点,这个标志应该测试真正怀疑库贾氏症的情况下,它被广泛用于筛查痴呆。3,32目前,这是一个接受病人招募监测研究工具及其使用报道导致流行病学数据大幅改善。到三十五这种方法会给随之而来的特异性。在以前的研究中,特异性高,因为只有真正怀疑库贾氏症患者进行了测试。2、3、36随后,对照组的扩展与各种急性神经系统疾病,这些代理标记的特异性的数字下降了。不单指在神经退行性疾病的潜在库贾氏症的鉴别诊断,之前报道特异性数据(表e 1)继续适用。2、3、36
14-3-3的组合与另一个标记增加灵敏度。1、5、21日,23日,24日最高的灵敏度是通过结合14-3-3水平升高的τ,S100b,或研究,但特异性最高的是当正常τ和研究水平的总和。
我们观察到大幅提高敏感性和特异性几个标记,当执行一个额外的LP在后来疾病阶段。这个观察是在单个案例报告发表的协议。10日,13日,21日,37岁,38在我们的分析,敏感性和特异性增加当第二LP的结果考虑在内。第二个CSF测试的结果可能有助于排除库贾氏症,因为随着时间的推移,脑源性蛋白水平下降的其他条件,但通常在库贾氏症进一步增加。因此,在怀疑的情况下,一个额外的LP数周后最初的一个建议来帮助支持或排除库贾氏症的诊断。
含有朊密码子129基因型,PrPSc同形像、疾病持续时间和发病年龄测试灵敏度sCJD患者的影响。
含有朊密码子129杂合的患者有较低的灵敏度在所有测试在脑脊液中执行。此外,PrPSc同形像2是一个独立的影响因素和效果更明显的患者至少有一个蛋氨酸等位基因。的影响含有朊密码子129基因型和PrPSc同形像在以前的研究评估,但由于较低的情况下,结果没有达到意义的水平。8、9、21
我们找到了一个高灵敏度的趋势在14-3-3 LP执行在最后三分之一的疾病,但检验结果未达到统计上的显著水平。此外,正如我们的分析所示,标记的敏感性增加后来执行第二个LP的疾病。这与先前的报道是一致的,这种疾病阶段,据报道,与14-3-3的水平9或14-3-3,τ,Aβ1-42。21
疾病持续时间和灵敏度的测试问题已经解决在几项研究。5、8一般来说,现有的许多测试更敏感患者的一个典型的疾病持续时间短。这已被证明的检测周期夏普和脑电图慢波复合物,CSF 14-3-3, hyperintense基底神经节在MRI或磷酸化τ脑脊液中浓度。9日,39-41在我们的研究中,疾病的持续时间小于6个月为14-3-3,高灵敏度显著相关τ,S100b蛋白。
发病年龄显著相关测试灵敏度,是降低这些疾病的患者发病前40年。一些疾病修改因素可以解释这种观察。可以假设非典型库贾氏症亚型出现更频繁地在年轻的年龄,比如MV2亚型。在年轻患者生存时间更长,这也是逐步减少疾病相关课程,因此有可能减少急性神经损伤患者。42另一方面,在逻辑回归分析,年龄作为一个独立的变量。其他因素,仍有待证明,包括年龄相关性神经脆弱,导致更加明显释放脑源性蛋白质进入脑脊液。
承认
作者感谢所有参与国家的医生发送脑脊液和血液样本,提供临床和neuropathologic患者数据。他们也感谢以斯帖cro, Jolanthe Zellner,玛雅Schneider-Dominco时,毛里Peltola,玛丽安瓦克。
脚注
附加材料与本文可以发现首页网站。去www.首页neurology.org和向下滚动8月22日发行的目录找到本文的标题链接。
全国研究支持希腊,希腊卫生部通过龙骨(传染病控制中心),在意大利卫生部和Instituto Superiore di Sanita荷兰,在荷兰的福利和体育,在斯洛伐克由卫生部和欧洲委员会(SEEC-CJD项目),西班牙得到了Ministerio de Ciencia y Tecnologaia (MCyT邂逅了2001/2216)和西班牙Ministerio de Sanidad y Consumo授予数量DGVI 1312/04-1,在瑞士Bundesamt皮毛一厢情愿,伯尔尼(NRPE-BAG合约03.001297°n 04.002363°),在英国卫生部和苏格兰家庭办公室卫生,和在德国Bundesministerium毛皮和一厢情愿Soziale Sicherung(融合)(广州:325 - 4471 - 02/15)和Bundesministerium毛皮陶冶和大幅减退(BMBF) (KZ: 0312720、01 gi0301 I.Z)。拉奎尔Sanchez-Valle post-residency格兰特的接受者从皇家研究院祝您健康卡洛斯三世(ISCIII,马德里,西班牙)。Pascual Sanchez-Juan得到了postMIR格兰特,Wenceslao洛佩兹Albo IFIMAV研究所的Fundaciaon Paublica Marquaes de Valdecilla。协作研究资助来自欧盟委员会(EC) (qlg3 - ct - 2002 - 81606,协调员:即Zerr)。
披露:作者报告没有利益冲突。
收到2005年7月26日。2006年4月27日接受的最终形式。
