文摘
背景和目标评估immune-specific响应后完整的严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2 (SARS-CoV-2)疫苗接种的多发性硬化(MS)患者治疗不同的疾病修饰药物检测的血清学的和t细胞反应。
方法卫生保健工作者(卫生工作者)和MS患者,已完成的服用时间mRNA-based疫苗SARS-CoV-2过去2 - 4周,为从2平行进行的前瞻性研究在罗马,意大利,在国家传染病研究所Spallanzani-IRCSS和圣卡米洛•Forlanini医院。血清学反应是评估量化region-binding域(RBD)和中和抗体。细胞介导的反应分析了遗传测试量化干扰素(IFN) -γ应对高峰肽。细胞应对飙升的刺激被fluorescence-activated细胞识别分类分析。
结果我们前瞻性的186接种疫苗的个体:78卫生工作者和108名患者28例MS患者IFN-β对待女士,35 fingolimod,与ocrelizumab cladribine 20, 25。低anti-RBD抗体反应率被发现在患者ocrelizumab (40%,p< 0.0001)和fingolimod (85.7%,p= 0.0023)相比,卫生工作者和患者cladribine或IFN-β。Anti-RBD ocrelizumab患者抗体效价的中位数(p< 0.0001),fingolimod (p< 0.0001)和cladribine (p= 0.010)相比,卫生工作者和IFN-β-treated病人。血清中和活动存在于所有的卫生工作者测试并在只有少数fingolimod-treated病人(16.6%)。T-cell-specific反应被发现在大多数患者(62%),女士虽然显著降低IFN-γ水平相比,卫生工作者。t细胞反应的最低频率在fingolimod-treated病人(14.3%)被发现。T-cell-specific响应与淋巴细胞计数和anti-RBD抗体效价(ρ= 0.554,p< 0.0001和ρ= 0.255,p= 0.0078)。IFN-γ是由CD4 t细胞反应+和CD8+T细胞。
讨论信使核糖核酸疫苗诱导体液和细胞介导特异性免疫反应对峰值肽在所有卫生工作者和患者在大多数这些结果女士携带相关疫苗管理的影响,提出促进疫苗接种在所有治疗的患者。
证据的分类这项研究提供了第三类数据,SARS-CoV-2信使核糖核酸疫苗诱导体液和细胞介导特异性免疫反应与病毒性峰值蛋白质在大多数患者MS。
术语表
- COVID-19=
- 2019年冠状病毒病;
- CPE=
- 细胞病理效应;
- DMT=
- 疾病修饰治疗;
- 的边后卫=
- 胎牛血清;
- HCW=
- 卫生保健工作者;
- 干扰素=
- 干扰素;
- 免疫球蛋白=
- 免疫球蛋白G;
- INMI=
- 国家传染病研究所;
- 位差=
- 四分位范围;
- PBMC=
- 外周血单核细胞;
- RBD=
- region-binding域;
- SARS-CoV-2=
- 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2
多发性硬化(MS)是中枢神经系统的炎症性自身免疫性疾病和残疾的主要原因在年轻的成年人1在西方国家。大多数人与女士与免疫调节和免疫抑制药物治疗,这可能会增加机会性感染的风险,感染相关性住院治疗,感染相关性死亡率。2,- - - - - -,4
冠状病毒病2019年(COVID-19)大流行造成的严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2 (SARS-CoV-2)已经成为人与人之间传播的疾病严重的全球健康影响5和困难的临床管理。6,7
大规模接种疫苗是最有效的公共卫生措施控制COVID-19大流行和一个全球努力开发并散发一种有效的疫苗生产的几个有效的选项。现在已经出现了一些数据关于mRNA平台疫苗的效力,即BNT162b2和信使rna - 1273疫苗诱导强烈的抗体和细胞介导免疫反应在天真的健康人。8,- - - - - -,12疫苗诱导的能力协调诱导体液和细胞介导的手臂是一个更有效的基本战斗SARS-CoV-2感染13,14;这是特别重要的人对待女士免疫疗法针对致病的炎症过程。15,16
疾病修饰治疗(儿童)用于女士的行为在不同的免疫系统。根据其作用机理,可以分为:(1)免疫调制剂:干扰素(干扰素)-βglatiramer醋酸,富马酸二甲酯,teriflunomide;(2)细胞贩运分子改变像S1P受体调节剂(即。fingolimod)和α4-integrin抗体(natalizumab);(3)减少血液的药物(ocrelizumab anti-CD20抗体;cladribine,模拟干扰DNA合成嘌呤诱导长期淋巴细胞耗竭;和anti-CD52阿仑单抗抗体)。
这些儿童的总体效应影响体液和细胞介导免疫反应SARS-CoV-2疫苗是未知的。已经公布的初步数据表明BNT162b2疫苗的抗体反应受损的人对待女士fingolimod ocrelizumab,而它是保存在这些cladribine对待。17,- - - - - -,19最近,Guerrieri et al。20.在实际研究中与女士32人的体液反应显示更高的频率在fingolimod患者(62.5%)。这些数据是必不可少的健康决定,需要确认和补充的评价T-cell-specific响应。
本研究的目的是评估anti-region-binding域(RBD)中和抗体和峰值(S)您完整SARS-CoV-2接种后的t细胞反应患者女士对待不同的儿童。
方法
标准协议的审批、登记和病人同意
人类研究协议被批准的一员Spallanzani国家传染病研究所(INMI)伦理委员会批准297/2021和319/2021。人体实验研究协议遵循伦理原则同意《赫尔辛基宣言》。从所有参与者获得书面知情同意。
研究人群
参与者从2为平行进行的前瞻性研究INMI一员Spallanzani。详细研究评估SARS-CoV-2接种疫苗的免疫反应在卫生保健工作者(卫生工作者)进入INMI女士和女士登记患者神经科学中心的部门圣卡米洛•Forlanini医院(意大利罗马)。
MS患者
共有108名参与者被录取。入选标准为例MS患者的招生(1)女士根据2017年麦当劳的诊断标准,21(2)持续DMT IFN-β治疗,fingolimod, ocrelizumab,或cladribine研究入口前至少6个月,和(3)完成疫苗接种周期(剂量)的mRNA疫苗前2 - 4周内。在病人接受脉冲治疗(ocrelizumab和cladribine),接种疫苗的时间后最后DMT政府原定的推荐意大利和欧洲神经病学学会COVID-19接种疫苗。首页特别是在MS患者,药物提供3个月的延迟ocrelizumab cladribine至少4周。疗法与IFN-βfingolimod没有打断当疫苗接种计划。22血液检查和淋巴细胞计数进行1周内采集标本时免疫分析。百分比和绝对的CD19计数+B细胞和血清免疫球蛋白G(免疫球蛋白)水平收集患者在1月内ocrelizumab从入学学习。
肽池T-Cell-Based测试
SARS-CoV-2 PepTivator肽池(Miltenyi研究)覆盖SARS-CoV-2峰值蛋白质的序列(PepTivator SARS-CoV-2 Prot_S1, Prot_S,和Prot_S +)。24,- - - - - -,26PepTivator肽池是由15个氨基酸的肽有11个氨基酸长度重叠。
IFN-γ全血化验
全血(600µL)是刺激与SARS-CoV-2飙升肽池乘48-well板根据浓度的报道24和37°C(5%孵化有限公司2)。等离子体是收获后20 - 24小时的刺激和储存在−80°C到使用。IFN-γ水平量化血浆样品中使用一个自动ELISA (ELLA,蛋白质简单)。IFN-γ的刺激值样本,如果要减去控制。这个试验的检测极限是0.17 pg / mL。
外周血单核细胞和体外刺激
外周血单核细胞(PBMCs)从一个小的子集接种疫苗的个体(8 7 MS患者和卫生工作者)在密度梯度离心法分离(SepMate-50猫# 85460或SepMate-15猫# 85420,干细胞技术)根据制造商的过程。7卫生工作者,作为对照组,采用控制另一个出版。27所有样品都冻结在heat-inactivated胎牛血清(的边后卫;Euroclone SpA)与10% DMSO和存储在液氮中。PBMCs解冻,统计,评估可行性,休息2 - 4小时37°C RPMI + 10%的边后卫前进一步使用。完全培养基是刚做好如下:rpmi - 1640, 10%的边后卫,1%l谷氨酰胺,1%青霉素和链霉素(Euroclone SpA)。细胞被播种在浓度为2.5×106细胞/毫升乘96 -多井板(配角;西格玛奥德里奇)和刺激与钉肽池1µg /毫升或葡萄球菌肠毒素B (SEB)在200 ng / mL,作为一个积极的控制。Anti-CD28和anti-CD49d单克隆抗体(BD生物科学)添加2µg /毫升costimulate细胞。1小时后37°C(5%的孵化有限公司2),1µL /毫升的高尔基体插头(BD生物科学)添加到抑制细胞因子分泌的细胞培养。24小时后的孵化后,细胞染色如下所述。
t细胞亚群和胞内IFN-γ检测
PBMCs沾一个适当的组合fluorochrome-conjugated抗体准备的污点缓冲区(BD生物科学)。Cytofix / Cytoperm解决方案工具包(BD生物科学)是用于细胞内染色IFN-γ,根据制造商的指示(见eTable 1,links.lww.com/WNL/B668抗体和试剂的完整列表)。死细胞被排除在分析一边向前/分散控制,然后到700年可以解决的可行性污点(BD生物科学)。至少100000的事件在活细胞为每个样本分析,只要有可能。样本获得的BD抒情(BD生物科学)血细胞计数器。数据分析与FlowJo软件,版本10(树明星)。细胞因子是减去背景刺激条件。t细胞的反应被认为是积极的,当SARS-CoV-2上涨刺激PBMCs包含至少两个CD4的频率更高+或CD8+T细胞相比,如果控制和至少10 IFN-γ门事件在场。28
Anti-SARS-CoV-2-Specific免疫球蛋白评价
体液免疫接种反应被量化评估anti-nucleoprotein免疫球蛋白和anti-RBD免疫球蛋白(建筑师i2000sr;雅培诊断)。Anti-N-IgG被表示为任意单位/毫升和值≥1.4被认为是积极的。Anti-RBD-IgG被表示为绑定任意单位/毫升和值≥7.1被认为是积极的。
Microneutralization化验
中和抗体SARS-CoV-2被微量中和试验进行评估与生活SARS-CoV-2病毒菌株2019 - ncov / Italy-INMI1;GISAID加入ID: EPI_ISL_412974)。试验已经详细描述29日和基于抑制维罗E6细胞感染的血清稀释曲线,与细胞病变效应(CPE)在48小时postinfection决心。短暂,heat-inactivated和滴定血清(重复2倍连续稀释,稀释1:10)与相同体积的混合100 TCID50SARS-CoV-2和孵化37°C, 5%的公司230分钟。随后,96 -组织文化板块subconfluent州立E6细胞单层膜感染了100μL / virus-serum混合物和37°C和5%孵化有限公司2。标准化interassay程序,积极控制样本显示高(1:160)和低(1)中和活动包含在每个MNA会话。48小时后,微型板块由光学显微镜观察CPE的存在,然后用结晶紫染色溶液含有2%的甲醛。细胞生存能力是衡量光度计在595 nm (Synergy HTX多模标,BioTek)。最高的血清稀释抑制至少90%的CPE表示中和效价和表达为血清稀释(MNA的倒数90年)。
统计分析
数据分析使用图垫(GraphPad棱镜8 XML项目)。分类变量被报告为计算和比例;连续变量,包括IFN-γ水平和anti-RBD anti-N, MNA90年滴度,据报道中位数和四分位范围(差)。所有数据被非参数统计推断调查测试。克鲁斯卡尔-沃利斯检验是用于群体间的比较,Mann-WhitneyU测试Bonferroni调整成对比较,χ2测试分类变量。相关性的人口统计学、临床和实验室变量和血清学的spike-specific T-response mRNA-vaccinated个体,以及between-assay相关性,通过非参数评估斯皮尔曼等级测试之前和之后的多变量的调整。斯皮尔曼ρ> 0.7被认为是高度相关,0.7 0.5 <ρ>中度相关,ρ< 0.5低相关性。
双尾p值< 0.05被认为是重要的,除了子群分析MS-specific类型的治疗,在多样性应用根据Bonferroni校正方法,产生一个重大的2-tailedp0.0125(α/ 4)的阈值。
结果
人口统计学和临床特征的参与者
我们前瞻性地招收了186名接种参与者:108 MS患者和78名卫生工作者。人口统计学和临床资料收集登记(表1)。没有发现显著差异对年龄、性别、或原产国在两组之间。
28例MS患者接受IFN-β35 fingolimod,与ocrelizumab cladribine 20, 25。在第一个疫苗剂量治疗持续时间中值为8.9年(IFN-β差6.9 - -13.5),6.5年(fingolimod差3.6 - -8.1),和1.7年(ocrelizumab差1.1 - -2.3)。中位数时间从第一个管理cladribine第一疫苗剂量为1.7岁(差1.2 - -2.0);16的20例(80%)完成了第二年的治疗周期。中位数时间自上次药物假设是8.9个月(cladribine差7.7 - -12.7)和3.8个月(ocrelizumab差2.8 - -4.3)。
卫生工作者以及103 MS患者接受了BNT162b2疫苗;患者5女士收到了信使rna - 1273疫苗。中位数时间从第二疫苗剂量和血液样本收集23天(差)第21到26,在治疗组没有任何区别。
正如预期的那样,淋巴细胞计数以免疫为基础的化验取样时显著降低患者治疗的病人相比fingolimod与其他儿童(p< 0.0001)。患者ocrelizumab显示CD19的比例很低+B细胞(中位数0.04%;差0.03%—-0.09%;正常范围6% - -20%)和CD19+细胞绝对计数(平均0.89 /µL;差0.38 - -1.67细胞/µL;正常范围90 - 520细胞/µL分别)。在这些患者中,中值免疫球蛋白水平,获得1月内从研究招生,900 mg / dL (IQR 829 - 1100 mg / dL),除了2患者免疫球蛋白水平低于正常范围的最低限额(700 - 1600 mg / dL)。免疫球蛋白水平和anti-RBD效价之间不存在相关性(r年代= 0.26,p= 0.19)。
大多数参加卫生工作者是健康的(n = 64 [82%]);93.5%的未处理组(n = 73), 4% (n = 3)与糖皮质激素治疗过敏性疾病的历史,而没有临床数据适用于2.5% (n = 2)卫生工作者(见eTable 2,links.lww.com/WNL/B668)。
Serologic-Specific响应接种疫苗的个体
Anti-N抗体在MS患者和卫生工作者都无法觉察的,确认没有SARS-CoV-2研究人口自然感染(eFigure 1,links.lww.com/WNL/B668)。
可检测anti-RBD抗体反应是观察在所有卫生工作者(100%)。大多数患者女士(n = 87[80.5%])显示anti-RBD抗体反应,尽管血清反应阳性的病人的比例和定量根据正在进行的与儿童特定响应不同。可检测anti-RBD反应被发现在10/25 ocrelizumab患者(40%),与fingolimod 30/35(85.7%)的患者,在27/28 IFN-β患者(96.4%),在所有的病人(100%)接受cladribine (表2)。Ocrelizumab——fingolimod-treated病人显示低卫生工作者相比,反应率(p< 0.0001和p分别为= 0.0023)。
anti-RBD抗体效价显著低于中位数的患者接受ocrelizumab女士(p< 0.0001),fingolimod (p< 0.0001)和cladribine (p= 0.01)相比,卫生工作者。没有不同的血清学的平均效价相比,卫生工作者被发现在患者IFN-β(p= 0.359)(图1一个)。ocrelizumab-treated病人,更长的治疗时间明显减少anti-RBD抗体滴度(ρ=−0.529,p= 0.007),而年龄、BMI和疾病持续时间没有任何影响。此外,这些变量与减少anti-RBD fingolimod或cladribine(患者抗体滴度表3)。
(A)评价抗体(Ab)响应78年卫生保健工作者(卫生工作者)和108年根据药物治疗多发性硬化症患者分层在4组:ocrelizumab (n = 25), fingolimod (n = 35), cladribine (n = 20)和干扰素(IFN) -β(n = 28)。严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2 (SARS-CoV-2)特殊anti-receptor-binding域(RBD) Abs量化在血浆或血清样本。Anti-RBD免疫球蛋白G(免疫球蛋白)表示为绑定任意单位(BAU) /毫升和值≥7.1被认为是积极的。(B)评价IFN-γ应对高峰抗原。IFN-γ被自动ELISA测定血浆从刺激全血样品后,显示为中值减去背景。虚线标识每个测试的截止(高峰16 pg / mL和anti-RBD 7.1鲍起静/毫升)。每个黑点代表1样本。红色的横线表示中位数;使用Mann-Whitney测试和统计分析p如果≤0.0125价值被认为是显著的。
患者在cladribine ocrelizumab,之间不存在相关性anti-RBD抗体效价和时间自上次治疗周期(ρ= 0.111,188金宝慱官网下载p= 0.640和ρ=−0.014,p分别为= 0.946)。此外,在那些接受ocrelizumab, anti-RBD效价不与血清免疫球蛋白水平(p= 0.19)。
IFN-γT-Cell-Specific响应接种疫苗的个体
所有卫生工作者表现出IFN-γspike-specific t细胞反应(78/78[100%]),与67年相比(62%),女士队列。不同比例的T-cell-specific反应被发现患者MS: 92%(23/25例)ocrelizumab-treated集团IFN-β-treated组89.3%(25/28例),70%(14/20例)cladribine-treated组和14.3%(5/35例)fingolimod-treated集团(p< 0.0001)。Cladribine——fingolimod-treated病人反应率显著降低相比,卫生工作者(p< 0.0001)(表2)。
的IFN-γT-cell-specific响应水平明显下降MS-vaccinated个人经历比在卫生工作者(儿童p< 0.0001)(表2和图1 b)。女士,患者性别、年龄、BMI、疾病持续时间和DMT治疗期间接种疫苗的时候并不影响IFN-γT-cell-specific响应。没有发现协会之间的IFN-γT-cell-specific响应和上述变量单一MS-treated集团(表3)。
患者在cladribine ocrelizumab, IFN-γT-cell-specific反应是与时间无关自从上次治疗周期(ρ=−0.353,p= 0.127和ρ=−0.271;p分别为= 0.189)。
是由CD4 IFN-γ响应+T细胞、CD8+T细胞
评估是否IFN-γT-cell-specific反应是由于CD4细胞+或CD8+t细胞子集,我们评估了IFN-γ-specific患者t细胞频率的刺激PBMCs 8女士(与cladribine 4接受IFN-β和4)和7个卫生工作者。我们选择IFN-βcladribine-treated病人因为他们显示,报道图1,良好的特殊抗体和t细胞反应。T细胞是封闭的如eFigure 2所述,links.lww.com/WNL/B668。在卫生工作者,IFN-γ-T-cell-specific反应是由CD4细胞+(图2一个)和CD8+T细胞(图2 b)和不同大小的响应(CD4中位数:0.279%,差0.193 - -0.427 vs CD8中位数:0.058%,差0.00 - -0.140)(图2 c)。在MS患者,只有CD4 IFN-γ反应是介导+T细胞(IFN-β:中值0.16%,差0.109 - -0.192和cladribine:中值0.13%,差0.117 - -0.163)(图2 c)。抗原CD4的频率+或CD8+T细胞是较低的MS患者和卫生工作者相比,尽管这种差异不显著(图2 c)。积极对SEB t细胞反应,作为一个积极的控制,被发现在所有科目,CD3的百分比+,CD4+,CD8+T细胞是卫生工作者和患者之间的可比性女士(数据没有显示)。
卫生保健工作者(卫生工作者)(n = 7)和多发性硬化(MS)患者干扰素(IFN) -β-treated n = 4;cladribine-treated n = 4)刺激了钉肽游泳池和24小时的频率IFN-γ-specific T细胞被流式细胞术进行评估。图显示的频率代表HCW IFN-γ-specific T细胞,患者接受IFN-β女士,女士在患者CD4 cladribine+(A)和CD8子集+T-subset (B)。(C) CD4的频率+和CD8+t细胞反应(减法后如果条件值)卫生工作者和患者所示每个点代表一个不同的女士HCW或MS患者和黑色线条代表中位数。使用Mann-Whitney测试和统计分析p如果≤0.05价值被认为是显著的。
相关性Anti-RBD抗体效价,IFN-γT-Cell-Specific响应,和淋巴细胞计数
显著轻微的相关性观察患者anti-RBD抗体效价与女士IFN-γ-spike-specific t细胞反应(ρ= 0.255,p= 0.0078)(图3一),坚持在调整了性别、年龄、BMI和疾病持续时间(ρ= 0.234,p= 0.017)。女士没有显著的相关性被发现在不同的治疗组(数据未显示)。之间没有相关性淋巴细胞计数和anti-RBD抗体效价(ρ= 0.132,p= 0.211)(表3),而定量IFN-γ-T-cell-specific响应与淋巴细胞计数女士在整个集团(ρ= 0.569,p< 0.001),但不是在单一DMTs-treated子群(图3 b和表3)。
(A)之间的相关性评价干扰素(IFN) -γ水平以应对高峰和anti-receptor-binding域(RBD)抗体(Abs)在108年多发性硬化(MS)患者。Anti-RBD免疫球蛋白G表示为绑定任意单位(BAU) /毫升和值≥7.1被认为是积极的。轻微的显著相关性被发现在患者MS(ρ= 0.255,p= 0.0078)。(B)评价相关性IFN-γ水平飙升和淋巴细胞数量在MS患者的一组中(n = 87)。女士IFN-γ水平与患者的淋巴细胞数量(ρ= 0.569,p< 0.0001)。虚线标识每个测试的截止(高峰16 pg / mL和anti-RBD 7.1鲍起静/毫升)。每个黑点代表1样本。之间的相关性分析被非参数斯皮尔曼等级测试评估。一个双向p值< 0.05被认为是具有统计学意义。
相关性Anti-RBD抗体效价和中和活动
我们评估了69卫生工作者的血清中和活动(88.5%)。所有参加卫生工作者显示检测到中和抗体的效价明显与anti-RBD滴度(ρ= 0.754,p< 0.001)(图4一)。在MS患者中,进行中和试验只在24例(68.6%)患者fingolimod由于低抗体滴度,描述的特定抗体的中和能力引起疫苗接种的。只有4/24(16.6%)的患者显示中和活动,虽然在低浓度测定(图4 b),与中和抗体之间的显著相关性和anti-RBD抗体滴度(ρ= 0.591,p= 0.0024)。
anti-receptor-binding域之间的相关性(RBD)免疫球蛋白G(免疫球蛋白)水平和中和抗体(Abs)在(a)的小组评估了卫生保健工作者(卫生工作者)(n = 69)和(B)多发性硬化(MS)患者在fingolimod疗法(n = 24)。Anti-RBD免疫球蛋白被表示为绑定任意单位(BAU) /毫升和值≥7.1被认为是积极的;中和抗体被表示为稀释的倒数和值≥10被认为是积极的。强大的显著相关性被发现在卫生工作者(ρ= 0.754,p< 0.0001),而一个温和的相关性被发现患者MS(ρ= 0.591,p= 0.0024)。虚线标识每个测试的截止(7.1 anti-RBD BAU /毫升和MNA90年8)。每个黑点代表1样本。之间的相关性分析被非参数斯皮尔曼等级测试评估。一个双向p值< 0.05被认为是具有统计学意义。
这项研究提供了第三类数据,SARS-CoV-2信使核糖核酸疫苗诱导体液和细胞介导特异性免疫反应与病毒性峰值蛋白质在大多数患者MS。
讨论
本研究结合分析体液和细胞免疫反应SARSCoV-2疫苗接种的人对待女士不同的儿童。
大规模疫苗接种对SARS-CoV-2控制疫情的关键是持续的在世界各地的大量人口。协调引起的体液和细胞介导反应特定的疫苗接种是唯一可用的工具更有效预防SARS-CoV-2感染,症状出现,严重疾病的结果。13,14特别是体液反应阻断病毒复制本身,而杀死病毒感染细胞特异性病毒t细胞反应。30.
最近,Achiron et al。17证明,在125年一群患者MS, COVID-19体液的发展应对mRNA-based疫苗BNT162b2在所有患者未经治疗的患者和所有女士cladribine。在相同的研究中,只有22.7%的患者ocrelizumab fingolimod发达SARS-CoV-2患者和3.8%的抗体。这些结果被证实在一个非常小的法国,31日,只有部分患者在意大利系列32显示女士在32.5%(6/16)患者体液反应ocrelizumab,而且在fingolimod患者的62.5% (10/16)。20.
在这项研究中,我们将演示一个正常的定性和定量体液反应在IFN-β患者COVID-19疫苗接种。我们确认,100%的患者cladribine发达mRNA-based疫苗的体液反应,尽管抗体效价略低于卫生工作者。我们找到了一个能被检测出的体液反应fingolimod患者的85.7%,在40%的那些ocrelizumab处理,都与一个anti-RBD-antibody效价和卫生工作者相比显著降低。这些发现与以前的结果一致COVID-19以外的疫苗,显示体液反应类似于IFN-β-treated病人,健康的人32和降低ocrelizumab患者抗体效价33和fingolimod。34更高比例的积极的特定antispike血清学反应患者接受fingolimod女士和ocrelizumab相比,由Achiron et al。17可能是因为这里使用的更精确的血清学测试来检测特定的反应。
几乎没有什么可用的数据关于T-cell-specific COVID-19疫苗接种引起的反应在治疗或未经治疗的患者女士最近,Apostolidis et al。35表明anti-CD20代理显著降低飙升,RBD-specific抗体和记忆b细胞反应在大多数患者女士这种效果是依赖于时间从去年anti-CD20治疗和b细胞重建的程度。35这项工作相比,在这里,我们报告的证据定量和定性SARS-CoV-2-spike-specific t细胞反应更大的患者群女士(n = 108 vs n = 20)不仅与anti-CD20药物治疗,但也与其他不同的儿童。在最近的研究中,T-cell-specific反应是观察到ocrelizumab患者的92%,89.3%的患者IFN-β,cladribine患者和70%的,但只有在fingolimod-treated病人的14%。IFN-γ-T-cell-specific反应是降低在所有患者治疗与卫生工作者相比,女士同意Apostolidis et al。35描述的结果只有1组下anti-CD20治疗。此外,我们分析了T细胞反应容易执行的全血化验,量化生产的IFN-γT细胞在特定的刺激。24,36因此,这些结果与淋巴细胞的数量。
Ocrelizumab anti-CD20单克隆抗体,耗尽B淋巴细胞和干扰抗体生产的过程。37这种机制导致减少体液免疫接种反应,严重COVID-19的风险更高,2,- - - - - -,4,19和持续的可能性SARS-CoV-2 ocrelizumab-treated感染患者尽管感应SARS-CoV-2-specific t细胞反应。38众所周知,血清免疫球蛋白和IgM水平降低与ocrelizumab治疗持续时间39;这证实了我们的研究结果显示治疗时间和实体之间的关系的体液反应SARS-CoV-2疫苗。我们表明,ocrelizumab-treated病人发起spike-specific患者t细胞反应与发达IFN-β或cladribine。相关的t细胞反应,是否存在体液免疫受损,足以控制SARS-CoV-2感染是一个有争议的问题38本研究的目的。然而,保护t细胞反应的可能解释为什么持续治疗ocrelizumab并不总是增加SARS-CoV-2感染的严重程度,40为什么在一个小群anti-CD20-treated患者低频疫苗失败的报道。31日最后,长期潜在的有益效果SARS-CoV-2-specific t细胞应答可能有助于减少COVID-19疾病的严重程度。
Fingolimod是鞘氨醇1-phospate调制器,阻止T细胞出口淋巴结,减少循环淋巴细胞的数量。这种机制支持我们的研究结果显示减少T-cell-specific和fingolimod-treated患者的体液反应。我们还证明,只有少数患者fingolimod抗病毒中和能力。
体外t细胞反应糖蛋白是由CD4 SARS-CoV-2飙升+和CD8+T细胞11,24并确认在我们的卫生工作者人群接种疫苗。27CD8+患者t细胞反应中没有cladribine或IFN-β。众所周知,这些疗法可能对CD4产生影响+和CD8+t细胞数量41,42并通过CD8 spike-specific反应+只有十分之一的CD4 T细胞+t细胞的反应24,36因此很难发现如果存在。这些结果需要在更大的群组研究中确认病人。
这项研究有一些局限性。首先,小群的大小限制研究的力量,特别是对于比较接种不同儿童发展的影响。然而,患者的注册参与者代表女士,很有特点,临床和免疫。第二,免疫反应的评估是在单个时间点postvaccination和方法用于检测t细胞的反应是基于测量单个细胞因子(IFN-γ),不同于已发表的研究评估额外的辅助1细胞因子。12,23然而,正如我们已经表明,IFN-γt细胞的反应与RBD抗体滴度,12因此IFN-γ可能被认为是一个健壮的参数测量T-cell-specific疫苗接种后反应诱导。
本研究的主要优势之一,与之前的作品相比,17,18,20.是体液免疫反应的评估使用特定anti-RBD免疫球蛋白和SARS-CoV-2中和测试,除了两CD4 t细胞反应的特征+或CD8+t细胞参与。本研究中使用的化验检测SARS-CoV-2-specific反应很容易和高度可再生的,24,36因此,兼容常规监测接种疫苗的人。事实上,t细胞反应是使用全血测定发现,类似于当前的平台测试T-cell-specific反应结核分枝杆菌。43
这是第一次研究证明的发展T-cell-specific回应SARS-CoV-2在大多数患者DMT-treated fingolimod患者的最低水平。一起观察有关体液反应,这些数据携带相关影响管理疫苗女士,女士建议,促进疫苗接种在所有患者治疗未来的研究需要评估后体液和t细胞反应的长寿COVID-19 MS患者的疫苗接种和不同时间窗的影响疫苗接种免疫ocrelizumab患者发展。这些数据将是关键定义最好的疫苗接种战略平衡MS疾病进展的风险和防范SARS-CoV-2感染。
研究资金
支持INMI”一员Spallanzani Ricerca Finalizzata covid - 2020 - 12371675和Ricerca Corrente新兴感染,均由意大利卫生部对COVID-19研究的资助从Esselunga SpA、相机di Commercio工业e Artigianato di罗马公司期布鲁Servizi SpA, Fineco银行SpA, Associazione Magistrati德拉科尔特大学一些孔蒂,和公司Mocerino Frutta浅滩浅滩srl。
披露的信息
c . Tortorella接受谢礼来说,差旅补助,从生原体和顾问委员会,Merck-Serono, Bayer-Schering, Teva,赛诺菲,罗氏,Mylan Almirall,诺华。a . Aiello报告没有披露相关的手稿。c Gasperini收到费用作为议长或顾问委员会从默克公司,拜耳,生原体,诺华,Teva,赛诺菲,罗氏Almirall, Mylan。c . Agrati c . Castilletti s Meschi g . Matusali f . Colavita c . Farroni g . Cuzzi e . Cimini e·塔尔塔利亚,诉Vanini报告没有披露相关的手稿。从生原体已收到美国Ruggieri谢礼,默克公司Serono,诺华和Teva咨询服务,说,和/或旅行的支持。l . Prosperini收到咨询费和/或演讲者从生原体谢礼,Celgene公司,Genzyme, Merck-Serono,诺华和梯瓦;从生原体差旅补助,Genzyme、诺华和Teva;从意大利女士社会和研究经费(Associazione Italiana Sclerosi Multipla)和Genzyme。美国Haggiag收到生原体旅行的资金和/或演讲者谢礼,罗氏,Genzyme,诺华,CSL贝林。美国Galgani接受谢礼说从生原体和差旅补助,赛诺菲-安万特,默克公司Serono, Bayer-Schering, Teva, Genzyme Almirall,诺华。 M.E. Quartuccio, A. Salmi, F. Repele, A.M.G. Altera, F. Cristofanelli, A. D'Abramo, N. Bevilacqua, A. Corpolongo, V. Puro, F. Vaia, M.R. Capobianchi, and G. Ippolito report no disclosures relevant to the manuscript. E. Nicastri is a member of the advisory board for Gilead, Lilly, and Roche and received fees for educational training from Gilead, Lilly, and Roche. D. Goletti is a member of the advisory board for bioMérieux and Eli-Lilly and received fees for educational training or consultancy from Biogen, Celgene, DiaSorin, Janssen, Qiagen, and Quidel. Go to首页Neurology.org/N为充分披露。
承认
作者感谢护士中心女士的圣卡米洛•Forlanini医院,研究病人,和合作者的国家传染病研究所(INMI) COVID-19疫苗研究小组:丹尼尔·拉帕,马西莫Francalancia,极光贝蒂尼,会Gramigna, Federica Forbici, Paola加利亚历山德拉Marani,阿德里亚诺可能,安德里亚·卡布里Annapaola澳网,尼可莱塔,Orchi,欧Butera,琳达Petrone, Elisa Petruccioli。
附录的作者
附录2 Coinvestigators
脚注
去首页Neurology.org/N为充分披露。资金信息和披露认为作者相关的,如果有的话,年底提供这篇文章。
↵*这些作者的贡献同样co-first作家这个工作。
INMI COVID-19疫苗研究小组coinvestigators中列出附录在本文的最后。
这篇文章加工费是由国家传染病研究所Diseases-IRCCS l . Spallanzani。
编辑、页面177年
类的证据:NPub.org/coe
- 收到了2021年7月7日。
- 接受的最终形式2021年11月4日。
- 版权©2021年作者(年代)。发表的Wolters Kluwer健康,公司代表美国神经病学学会。首页
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